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测定BOD5时的水样稀释法分为一般稀释法和直接稀释法两种。其中，一般稀释法需要较多的稀释水或接种稀释水。 一般稀释方法是在1L或2L量筒中加入约500mL稀释水或接种稀释水，然后加入一定体积的水样计算，加入稀释水或接种稀释水至满刻度，用玻璃杯末端带有橡胶盘的杆被缓慢提起或浸没在水面下。最后用虹吸管将混合均匀的水样溶液引入培养瓶中，并使充满溢出少许，小心盖好瓶塞，并水封瓶口。对于第二或第三稀释比例的水样，可用剩余的混合溶液，计算后加入一定量的稀释水或接种稀释水，以同样的方法混合后引入培养瓶中。 直接稀释法是先用虹吸法将约一半体积的稀释水或接种稀释水引入已知体积的培养瓶中，然后沿瓶壁注入按稀释倍数计算出的每个培养瓶中应加入的水样体积，然后将稀释水或接种稀释水引入瓶颈，小心盖上瓶塞，用水封住瓶口。 使用直接稀释法时，要特别注意稀释水的最后引入或稀释水的接种不能太快。同时，需要寻找最适体积的操作规律，避免因溢出过多而导致误差。 无论采用哪种方法，将水样引入培养瓶时，动作一定要轻柔，避免产生气泡，防止空气溶入水中或水中氧气溢出。同时，需要确保在关闭瓶盖时一定要小心，以免瓶内有气泡影响测量结果。培养瓶在培养箱中培养时，应每天都要检查其水封情况，及时加水，防止封口的水蒸发，造成空气进入瓶内。另外，5d前后使用的两个培养瓶的体积必须相同，以减少误差。
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